318C + 全自動酶標儀數(shù)據(jù)處理操作：吸光度值讀取、標準曲線繪制與濃度計算步驟
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-17
318C + 全自動酶標儀是臨床免疫檢測、科研實驗中酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的核心設備，其數(shù)據(jù)處理環(huán)節(jié)（吸光度讀取、標準曲線擬合、濃度計算）直接決定檢測結(jié)果的準確性 —— 若操作不當（如空白扣除錯誤、曲線擬合模型選錯），可能導致假陽性 / 假陰性結(jié)果，影響臨床診斷或?qū)嶒灲Y(jié)論。本文基于 318C + 儀器自帶的 “ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件”，詳解從吸光度讀取到濃度計算的全流程操作要點，同時說明數(shù)據(jù)驗證與誤差控制方法，確保數(shù)據(jù)處理合規(guī)、可靠。?
一、吸光度值讀取：基礎數(shù)據(jù)采集與預處理?
（一）檢測后數(shù)據(jù)調(diào)取?
- 數(shù)據(jù)進入路徑：儀器完成檢測后，自動跳轉(zhuǎn)至 “檢測結(jié)果” 界面；若需調(diào)取歷史數(shù)據(jù)，點擊軟件左側(cè) “數(shù)據(jù)管理”→“檢測記錄”，通過 “檢測日期、項目名稱、操作員” 等篩選條件，找到目標檢測任務（建議命名規(guī)則：項目名稱 + 日期 + 批次，如 “新冠抗體檢測_20240520_01”）；?
- 原始數(shù)據(jù)查看：在 “原始數(shù)據(jù)” tab 頁，可查看每孔的吸光度值（A 值），界面按酶標板孔位（1-12 列、A-H 行）矩陣顯示，同時標注 “空白孔、標準品孔、樣品孔”（檢測前需在 “樣品設置” 界面預設孔位屬性，避免混淆）；需重點關(guān)注空白孔 A 值（通常要求≤0.1Abs，若超出范圍，需排查是否存在試劑污染或光路干擾）。?
（二）吸光度值預處理（關(guān)鍵步驟）?
- 空白扣除設置：點擊 “數(shù)據(jù)預處理”→“空白扣除”，選擇扣除方式：?
- 若為 “單空白孔”（如 A1 孔為空白），選擇 “單點扣除”，軟件自動用所有孔 A 值減去空白孔 A 值；?
- 若為 “復空白孔”（如 A1、A2 均為空白），選擇 “平均扣除”，軟件先計算空白孔 A 值平均值，再進行整體扣除；?
注意：空白孔需僅含稀釋液 / 緩沖液，不可混入標準品或樣品，否則會導致扣除后數(shù)據(jù)偏差；?
- 異常值剔除：查看標準品孔 A 值，若某一標準品孔 A 值與同濃度其他孔（如復孔）偏差＞10%（計算公式：|A 單 - A 平均 |/A 平均 ×100%），需判斷是否為操作誤差（如加樣量不準、孔內(nèi)有氣泡）：?
- 若確認是偶然誤差，點擊 “異常值剔除”，勾選該孔后選擇 “剔除”，軟件將用剩余復孔平均值參與后續(xù)計算；?
- 若無法判斷，需重新檢測該標準品孔，避免因異常值導致標準曲線線性不佳。?
二、標準曲線繪制：模型選擇與擬合驗證?
（一）標準品濃度錄入?
- 濃度設置：點擊 “標準曲線”→“濃度設置”，按標準品說明書錄入對應孔位的濃度值（如標準品濃度梯度為 0、1、5、10、20、50ng/mL，需與酶標板孔位一一對應，不可錯位）；若為倍比稀釋標準品，可選擇 “自動計算濃度”，輸入初始濃度與稀釋倍數(shù)（如初始濃度 100ng/mL，稀釋倍數(shù) 1:2，軟件自動生成 0、3.125、6.25、12.5、25、50ng/mL 梯度）；?
- 單位設置：根據(jù)檢測項目選擇濃度單位（如 ng/mL、U/mL、μmol/L），確保與后續(xù)樣品濃度單位一致，避免單位混淆導致結(jié)果錯誤。?
（二）曲線擬合模型選擇與擬合?
- 模型適配原則：根據(jù) ELISA 實驗類型選擇擬合模型，318C + 支持 5 種常用模型，適配場景如下：?
- 線性回歸（Linear）：適用于標準品 A 值與濃度呈嚴格線性關(guān)系（如部分小分子抗原檢測，R² 需≥0.995）；?
- 四參數(shù)邏輯斯蒂回歸（4-PL）：適用于 A 值與濃度呈 “S” 型曲線（多數(shù) ELISA 檢測，如抗體、大分子抗原，可自動擬合上平臺期、下平臺期，擬合精度高）；?
- 三參數(shù)邏輯斯蒂回歸（3-PL）：適用于無下平臺期的 “S” 型曲線，常見于低濃度標準品 A 值接近空白的場景；?
操作提示：點擊 “模型選擇”，軟件會自動推薦擬合模型（基于標準品 A 值分布），但需人工驗證擬合效果；?
- 曲線擬合與驗證：點擊 “擬合曲線”，軟件生成標準曲線圖形（X 軸為濃度，Y 軸為扣除空白后的 A 值），同時顯示擬合參數(shù)：?
- 線性模型：查看 R²（決定系數(shù)，≥0.99 為合格）、截距（接近 0 為宜）、斜率（符合試劑盒預期范圍）；?
- 4-PL 模型：查看相關(guān)系數(shù)（R≥0.998）、EC50（半數(shù)有效濃度，需在標準品濃度范圍內(nèi)）；?
若擬合參數(shù)不達標（如 R²＜0.98），需檢查：①標準品濃度錄入是否錯誤；②異常值是否已剔除；③模型選擇是否適配，必要時重新進行檢測。?
三、樣品濃度計算：結(jié)果生成與數(shù)據(jù)驗證?
（一）自動計算與稀釋倍數(shù)校正?
- 濃度自動計算：擬合曲線合格后，軟件自動根據(jù)樣品孔的扣除空白 A 值，代入標準曲線方程計算濃度，結(jié)果顯示在 “樣品結(jié)果” tab 頁，同時標注 “未稀釋濃度”；?
- 稀釋倍數(shù)校正：若樣品檢測前進行了稀釋（如血清樣品 1:10 稀釋），需點擊 “稀釋校正”，輸入對應樣品孔的稀釋倍數(shù)（如 10），軟件自動計算 “實際濃度”（實際濃度 = 未稀釋濃度 × 稀釋倍數(shù)）；?
注意：需在 “樣品設置” 界面提前標注稀釋樣品的孔位，避免漏校正導致結(jié)果偏低。?
（二）結(jié)果判斷與數(shù)據(jù)導出?
- 結(jié)果判讀：根據(jù)檢測項目標準（如臨床診斷標準、試劑盒說明書），設置 “陽性 / 陰性閾值” 或 “參考范圍”：?
- 如新冠抗體檢測：若濃度≥10ng/mL 為陽性，＜10ng/mL 為陰性，軟件可自動標注 “陽性（+）”“陰性（-）”；?
- 若樣品濃度超出標準曲線量程（如高于最高標準品濃度 50ng/mL），結(jié)果會顯示 “＞50ng/mL”，需稀釋樣品后重新檢測；若低于最低標準品濃度（如＜1ng/mL），顯示 “＜1ng/mL”，需確認是否為真陰性或檢測靈敏度不足；?
- 數(shù)據(jù)導出與保存：點擊 “數(shù)據(jù)導出”，選擇導出格式：?
- “Excel 格式”：包含原始 A 值、空白扣除后 A 值、標準曲線參數(shù)、樣品濃度、判讀結(jié)果，可用于實驗報告或數(shù)據(jù)存檔；?
- “PDF 報告”：自動生成標準化報告（含檢測項目、日期、操作員、標準曲線圖形、樣品結(jié)果），可直接打印；?
導出后需核對 1-2 個樣品的手動計算結(jié)果（按標準曲線方程手動代入 A 值），與軟件計算結(jié)果對比，偏差需≤5%，確保數(shù)據(jù)無誤。?
四、數(shù)據(jù)處理注意事項與常見問題解決?
- 空白孔設置：每塊酶標板需單獨設置空白孔，不可用其他批次空白值替代（不同批次試劑空白可能存在差異）；?
- 復孔數(shù)據(jù)處理：樣品若為復孔檢測，軟件默認顯示平均值，需查看復孔偏差（≤10% 為合格），偏差過大需重新加樣檢測；?
- 曲線復用問題：標準曲線僅可用于同批次檢測（同一次開機、同批次試劑），不可跨批次復用（試劑穩(wěn)定性、儀器狀態(tài)變化會導致曲線偏移）；?
- 樣品濃度為 “0”：檢查是否忘記空白扣除，或樣品孔 A 值等于空白孔 A 值（可能為樣品未加樣或試劑失效）；?
- 標準曲線無擬合結(jié)果：檢查標準品濃度是否全部為 0，或標準品孔 A 值均低于空白孔 A 值（標準品失效，需更換）。?
綜上，318C + 全自動酶標儀的數(shù)據(jù)處理需嚴格遵循 “數(shù)據(jù)預處理 - 曲線擬合 - 濃度計算 - 結(jié)果驗證” 流程，核心在于確保原始數(shù)據(jù)準確、模型選擇適配、結(jié)果校正完整。通過規(guī)范操作，可有效降低數(shù)據(jù)處理誤差，為臨床診斷、科研實驗提供可靠的量化依據(jù)，適用于醫(yī)院檢驗科、疾控中心、高校實驗室等場景。
